La citogenética es el estudio de los cromosomas, su estructura y su herencia, aplicado a la práctica de la genética médica.
En la actualidad, los notables avances en la resolución y la precisión han hecho que el análisis de los cromosomas sea un procedimiento de importancia creciente en numerosas áreas de la medicina clínica.
Los trastornos citogenéticos están presentes en cerca del 1% de los nacidos vivos, en alrededor del 2% de las gestaciones de mujeres mayores de 35 años que acuden a diagnóstico prenatal y en alrededor de la mitad de todos los abortos espontáneos de primer trimestre.

CARIOTIPO PRENATAL

Este estudio está indicado en los siguientes casos:

• Edad materna avanzada (≥35años).
• Ansiedad materna.
• Anomalía serológica materna por el test de triple screening.
• Anomalía fetal por ultrasonido (“marcadores ecográficos”).
• Embarazo anterior con anomalías cromosómicas.
• Hijo previo con anomalías cromosómicas.
• Hijo previo polimalformado.
• Historia familiar de trastornos cromosómicos.
• Historia familiar de un trastorno ligado al cromosoma X para el que no existe un método específico de diagnóstico prenatal.
• Reordenamiento cromosómico en uno de los parentales: en balance (translocación, inversión,...) o desbalanceado (marcador cromosómico, mosaicismo, aneuploidía sexual).
• Riesgo de defecto del tubo neural
• Gestaciones obtenidas mediante técnicas de reproducción asistida.
• Otras causas que el ginecólogo considere importantes considerando la ayuda del asesoramiento genético oportuno.

Muestras:
Este estudio puede realizarse en:

1.- Líquido Amniótico:(Amniocentesis): 15-19 semanas de gestación.  La cantidad de muestra debe ser de 16- 20 mL en tubos de polipropileno estériles. Remitir al laboratorio en un plazo máximo de 24h a temperatura ambiente. Resultados: 14-21 días.
Consiste en la obtención de líquido amniótico por punción transabdominal mediante control ecográfico. El líquido amniótico contiene   células de la descamación de las membranas que rodean al feto y del propio feto que pueden cultivarse para hacer pruebas diagnósticas.

Ventajas:
- Calidad metafases: 450-550 bandas.
- Baja tasa de contaminación materna.
- Detección de mosaicos.

Limitaciones:
Riesgo pérdida fetal (0.5%-1% sobre el riesgo basal que tiene cualquier embarazo en esa etapa de la gestación).
No detecta deleciones por debajo de la resolución del cariotipo (no detecta Sd.microdeleción).

2.- Vellosidad Corial:(Biopsia de Corion): 10-14 semanas de gestación. La cantidad de muestra debe ser ≥5mg de tejido. La muestra puede ser tomada mediante extracción transcervical o transabdominal. Debe ser remitida al Laboratorio en un tubo estéril con medio de transporte (RPMI 1640 con antibióticos facilitado por el laboratorio) en un plazo máximo de 24h a temperatura ambiente. Resultados: 14-21 días.

Ventajas:
La biopsia de corion, al realizarse en el primer trimestre de gestación, se presenta como una alternativa de indudables ventajas frente a la amniocentesis cuya extracción se realiza en el segundo trimestre de gestación.
Posibilita información genética más precozmente que la amniocentesis.
Contribuye a la reducción de trastornos psicológicos de la madre, y en el caso de interrupción del embarazo, supone ventajas obstétricas.

Limitaciones:
- Cantidad y calidad de metafases obtenidas.
-  Contaminación materna.
-  Pérdida fetal, debido al riesgo de la técnica de extracción (1% sobre el riesgo base del 2 al 5% existente en el primer trimestre de gestación).
-  No detecta deleciones por debajo de la resolución del cariotipo (no detecta Sd.microdeleción).
-  Mosaicismos confinados a placenta.
En todos los casos donde se observa un mosaico o una aneuploidía cromosómica rara es aconsejable realizar un estudio de líquido amniótico para confirmar el cariotipo fetal.

3.- Sangre de Cordón Umbilical (Funiculocentesis/Cordocentesis):
20-21 semanas de gestación. La cantidad de muestra debe ser  2-5 ml. Debe ser remitida al laboratorio en un tubo de heparina de litio  en un plazo máximo de 24h a temperatura ambiente. (Mantenimiento hasta su envío: 4ºC). Resultados: 7 días.
La cordocentesis se utiliza para obtener una muestra de sangre fetal directamente del cordón umbilical con guía ecográfica.
Esta técnica se utiliza en situaciones en las que se ha detectado anomalías fetales por ecografía y ha fallado el  cultivo de células de líquido amniótico o ha dado resultados ambiguos.

Ventajas:
Es una segunda muestra para confirmar un diagnóstico, cuando es demasiado tarde para realizar otras pruebas de diagnóstico prenatal.

Limitaciones:
- Pérdida fetal 2-5%.
-  No detecta deleciones por debajo de la resolución del cariotipo (no detecta Sd.microdeleción).

FISH PRENATAL

La necesidad de tener un conocimiento temprano del estado de salud fetal ha llevado al desarrollo de  técnicas que realizan un marcaje con sondas de ADN fluorescente. Rutinariamente se estudian los cromosomas 13, 18, 21, X, Y que son aquellos que con mayor frecuencia provocan  trastornos de aneuploidías, originando los Síndromes de Patau, Edwards, Down, Turner o Polisomías X y Klinefelter, Doble Y o Double Male entre los más frecuentes.

Muestras:
Este estudio puede realizarse en:
Vellosidad Corial.
Líquido amniótico.
Sangre de cordón umbilical.
(mismas muestras que para el cariotipo).

Envío de muestras: En un plazo máximo de 24h a la extracción de la muestra.  Envío será a temperatura ambiente.
Tiempo de entrega de resultados:
Este procedimiento se realiza en células no cultivadas y su diagnóstico requiere de 24-48 horas. 

 Ventajas:

• Rapidez de la prueba (24-48h).
• No necesita células cultivadas.
• Reduce el nivel de ansiedad de los padres.

Limitaciones:

• No excluye aneuploidías de otros cromosomas no analizados en las sondas ni alteraciones estructurales cromosómicas.
• En muestras de líquido amniótico con contaminación hemática el resultado  puede ser no informativo.

Siempre debe complementarse con el Cariotipo fetal.

Comentario: Existe la posibilidad de detectar síndromes de microdeleción que se escapan a la resolución del cariotipo convencional y se pueden estudiar mediante sondas específicas (FISH) Ej: S.DiGeorge, S.Williams…
Ante la sospecha de un síndrome de microdeleción específico contactar con el Laboratorio.

BIOLOGIA MOLECULAR PRENATAL

QF-PCR PRENATAL.

La necesidad de tener un conocimiento temprano del estado de salud fetal ha llevado al desarrollo de  técnicas que detectan microsatélites del ADN con marcaje fluorescente. Rutinariamente se estudian los cromosomas 13, 18, 21, X, Y que son aquellos que con mayor frecuencia provocan  trastornos de aneuploidías, originando los Síndromes de Patau, Edwards, Down, Turner o Polisomías X y Klinefelter, Doble Y o Double Male entre los más frecuentes.

Muestras:
Este estudio puede realizarse en ADN que se extrae de:

• Vellosidad Corial
• Líquido amniótico
• Sangre de cordón umbilical
  (mismas muestras que para el cariotipo)
• Necesita una muestra adicional de sangre periférica EDTA de la madre

Envío de muestras: En un plazo máximo de 24h a la extracción de la muestra.  Envío será a temperatura ambiente.
Tiempo de entrega de resultados:
Este procedimiento se realiza en ADN extraído de células sin cultivar y su diagnóstico requiere de 48 horas. 

Ventajas:

• Rapidez de la prueba (48h).
• ADN (No necesita células cultivadas).
• Prueba objetiva (FISH depende subjetividad observador)
• Reduce el nivel de ansiedad de los padres.
• Distingue la contaminación con sangre materna.

Limitaciones:

• No excluye aneuploidías de otros cromosomas no analizados en las sondas ni alteraciones estructurales cromosómicas.

Siempre debe complementarse con el Cariotipo fetal.

Array-CGH Específico- PRENATAL

El diagnóstico prenatal es una materia en constante cambio, con continuas aportaciones de nuevos conocimientos  y tecnologías. Los profesionales de la salud deben ser conscientes de estos cambios y de la importancia de tener acceso a información actualizada a través de los propios programas de diagnóstico prenatal o de las clínicas de genética.
La detección de alteraciones genéticas durante el embarazo es una de las funciones más importantes del diagnóstico prenatal.
Por ello, se ha diseñado una plataforma de array-CGH, que realiza un cariotipo molecular, analizando el genoma completo de cada paciente, con una resolución aproximadamente 10 veces superior a la del cariotipo.
El Array Específico-Prenatal  es una herramienta que puede emplearse para detectar, de forma simultánea, la presencia o ausencia (amplificaciones o deleciones) de alteraciones genéticas y cromosómicas responsables de más de 100 síndromes congénitos que cursan con la presencia de malformaciones y/o retraso mental en diferentes grados de afectación. Esta plataforma genómica incluye desde síndromes cromosómicos frecuentes y conocidos como el Síndrome de Down hasta otros menos frecuentes, pero de gran impacto clínico como el Síndrome de Di George (se adjunta anexo el listado completo).
El Array Específico-Prenatal  está constituido por  un array-CGH que incluye 15000 sondas de oligonucleótidos, repartidas por el genoma humano completo a razón de 1 sonda cada 300 kilobases, dando una resolución media de detección de alteraciones de 1-1.5 megabases en todo el genoma.

Además,  el Array Específico-Prenatal  está centrado en la detección de alteraciones genéticas conocidas en genética médica y relacionadas con la aparición de cuadros sindrómicos. En estas regiones críticas, la resolución se aumenta unas 50 veces respecto a la que se obtiene en el cariotipo convencional y su potencia se iguala a cualquier otra tecnología molecular (FISH, MLPA, QF-PCR).

Indicaciones:

• Edad materna avanzada (≥35años).
• Ansiedad materna.
• Anomalía fetal por ultrasonido (“marcadores ecográficos”).
• Embarazo anterior con anomalías cromosómicas.
• Hijo previo con anomalías cromosómicas.
• Hijo previo polimalformado.
• Historia familiar de trastornos cromosómicos.
• Historia familiar de un trastorno ligado al cromosoma X para el que no existe un método específico de diagnóstico prenatal.
• Reordenamiento cromosómico en uno de los parentales: en balance (translocación, inversión,...) o desbalanceado (marcador cromosómico, mosaicismo, aneuploidía sexual).
• Riesgo de defecto del tubo neural.
• Gestaciones obtenidas mediante técnicas de reproducción asistida.
• Otras causas que el ginecólogo considere importantes considerando la ayuda del asesoramiento genético oportuno.

Ventajas:
- Por su resolución y su diseño orientado al diagnóstico genético.
- Protocolo reproducible y no depende de la obtención de metafases.
- Resultados fiables rápidamente.
- Tecnología altamente objetiva.
- Puede sustituir a la FISH prenatal, e incluso amplia la información.
- Elimina el riesgo de detectar CNV sin significado claro.
- Complementario al cariotipo convencional.
- Resultados de utilidad clínica.
Limitaciones:
- Permite detectar alteraciones en mosaico de hasta un 30% en la muestra (aproximadamente).
-  No se podrán diagnosticar aquellas alteraciones que no supongan una pérdida o una ganancia de material genómico, tales como: las mutaciones puntuales, las translocaciones o las inversiones balanceadas. Además, aquellas duplicaciones o deleciones inferiores al rango de resolución de la plataforma empleada o las alteraciones presentes en mosaico (en menos del 30% de la población celular), que podrían ser los causantes de la patología del paciente, también serán indetectables.
- No detecta poliploidías completas.

Muestra:
- Vellosidad Corial.
- Líquido amniótico.
- Sangre de cordón umbilical.
(mismas muestras que para el cariotipo).

Resultado: 5-10 días laborables.
72horas para casos de máxima urgencia.

NOTA INFORMATIVA: Adicionalmente, el Array Específico-Prenatal, debido a su alta resolución, puede detectar alteraciones cromosomales de ganancia o pérdida genómica presentes en un mosaico mínimo de un 30% de la muestra total, aunque no estén presentes específicamente en esta lista.

ANEXO:

Síndromes de microdeleción identificados con Array Específico-Prenatal

OTRAS PRUEBAS

DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTACIONAL (DGP)

Permite ofrecer una opción reproductiva a las parejas con alto riesgo de trasmitir patologías genéticas a su descendencia, seleccionando los embriones sanos. Está indicado en casos de:

• Portadores de alteraciones cromosómicas estructurales,
• Abortos de repetición,
• Fracasos previos en técnicas de reproducción asistida,
• Pacientes con FISH de espermatozoides alterada,
• Enfermedades hereditarias autosómicas o ligadas a los cromosomas sexuales.
  

El DGP se realiza en blastómeras fijadas en porta previamente biopsiadas del embrión en estadio de seis-ocho células. Se utiliza la técnica de FISH o de PCR específica, habiéndose establecido el proceso a seguir en un estudio previo de informatividad.

Envío de muestras: Inmediato (Blastómera fijada en porta).
Tiempo de entrega de resultados: 24-48 horas