Diagnóstico de Infecciones Oculares mediante Biología Molecular

El diagnóstico clínico de las infecciones oculares es necesario confirmarlo mediante cultivo o tinción de muestras intraoculares o raspados corneales. Sin embargo, solo el 54-69% de los casos de endoftalmitis dan positivo por cultivo y en el caso de queratitis llega hasta el 80% si no tenemos en cuenta las víricas. En algunos casos, como micosis, cultivos de micobacterias o anaerobios, los resultados suelen tardar más de una semana debido a que son de crecimiento lento y/o son microorganismos difíciles de identificar. El diagnóstico precoz y la intervención rápida es un elemento crítico para un tratamiento eficaz en estas infecciones. Esto ha llevado al desarrollo de pruebas diagnósticas independientes al cultivo como es la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Esta técnica permite detectar cualquier tipo de microorganismo en una muestra clínica basándose en la elección de secuencias del material genómico. Así pues, nos permite detectar bacterias, hongos, virus y parásitos causantes de la infección en un corto periodo de tiempo y con una alta sensibilidad.


¿En qué consiste la prueba?

A partir de la muestra tomada por el oftalmólogo se extrae el material genómico de las células y microorganismos presentes y posteriormente se amplifica mediante PCR la región específica del genoma seleccionado (bacteriano, fúngico, vírico o de parásitos).


¿Qué tipo de muestra se necesita?

    Endoftalmitis: Se requiere 0,1 ml de humor acuoso o 0,2 ml de humor vítreo. Se envía al laboratorio la jeringuilla con la que se tomó la muestra (no pasar a tubo).
    Queratitis: Raspado corneal con espátula de Kimura o con una aguja. El material obtenido se resuspende en 0,3 ml de suero fisiológico.
    Conjuntivitis: muestra conjuntival tomada con un hisopo de algodón seco (se puede aplicar un anestésico local).

Almacenamiento a 4ºC hasta recogida de muestras (24H).


¿Qué microorganismos detecta?

El test puede detectar cualquier tipo de microorganismo. Basándose en la sospecha clínica, el oftalmólogo indicará que microorganismos son los que pueden estar implicados en la infección y el laboratorio realizará la búsqueda de los microorganismos seleccionados.


Diagnóstico de endoftalmitis, uveitis y panuveitis

Se realiza la detección e identificación del material genético de los siguientes patógenos implicados en infecciones intraoculares en muestras de humor acuoso y/o vítreo.

    • Hongos. Detección e identificación a nivel de especie.
    • Bacterias. Detección e identificación a nivel de especie.
    • Mycobacterium tuberculosis.
    • Virus. Detección de:
      - Citomegalovirus
      - Epstein-Barr virus
      - HVS-tipo I
      - HVS-tipo II
      - Varicela Zoster virus
    • Parásitos: Detección de:
      - Toxoplasma gondii

Diagnóstico de queratitis

Detección de DNA en tejido corneal y conjuntival de los siguientes microorganismos.

    • Acanthamoeba sp.
    • Chlamydia trachomatis
    • Virus Herpes Simple-tipo I
    • Virus Herpes Simple-tipo II
    • Virus Varicela Zoster
    • Virus sarampión
    • Adenovirus
    • Micobacterias atípicas
    • Hongos. Detección e identificación a nivel de especie

¿Quién debería hacerse la prueba?

Todos aquellos pacientes con sospecha de infección y cultivo negativo que no remiten con el tratamiento administrado. Pacientes con endoftalmitis tardías. Pacientes con sospecha de uveitis infecciosa. Pacientes con sospecha de queratitis fúngicas o por Acanthamoeba. Pacientes con sospecha de conjuntivitis por Chlamydia. Aquellos pacientes cuyos cultivos de muestras clínicas fueron positivos pero no se logró identificar al microorganismo (en el caso de hongos o micobacterias atípicas).


¿Cual es la utilidad clínica?

La utilidad clínica remite directamente en la visión del paciente, la alta sensibilidad de la técnica nos permite descartar los casos realmente no infecciosos de los que lo son; la rapidez en el diagnostico nos permite instaurar el tratamiento cuanto antes ya que de ello depende la visión final del paciente. Y por último, el conocimiento del microorganismo causante de la infección a nivel de especie nos permite administrar el tratamiento adecuado.


Metodología del estudio molecular

El estudio molecular se realiza según la siguiente tabla:

Prueba

Método

Análisis

Muestra

Acanthamoeba sp

PCR

Detección DNA

Corneal y conjuntival

Adenovirus

PCR

Detección DNA

Corneal y conjuntival

Aspergillus

PCR

Detección DNA

Cornea, humor acuso y vítreo

Bacterias Detección

PCR

Detección DNA

Cornea, humor acuso y vítreo

Bacterias Identificacion

Secuenciación 16S

Identificación de especie

Cornea, humor acuso y vítreo

Candida

PCR

Detección DNA

Cornea, humor acuso y vítreo

Chlamydia trachomatis

PCR

Detección DNA

Corneal y conjuntival

Citomegalovirus

PCR

Detección DNA

Vítreo

Enterovirus

RT-PCR

Detección RNA

Corneal y conjuntival

Endoftalmitis bacteriana o fungica

PCR y secuenciación

Detección e identificación

Humor acuoso y vítreo

Epstein Barr

PCR

Detección DNA

Cornea, humor acuso y vítreo

Herpes simplex 1

PCR

Detección DNA

Cornea, humor acuso y vítreo

Herpes simplex 2

PCR

Detección DNA

Cornea, humor acuso y vítreo

Herpes simplex 1 y 2

PCR

Detección DNA

Cornea, humor acuso y vítreo

Hongos Detección

PCR

Detección DNA

Cornea, humor acuso y vítreo

Hongos Identificación

Secuenciación ITS-2

Identificación de especie

Cornea, humor acuso y vítreo

Mycobacterium sp. (Micobacterias atípicas)

PCR

Detección DNA

Cornea

Mycobacterium sp. Identificación (Micobacterias atípicas)

Secuenciación 16S

Identificación de especie

Cultivo o amplicón

Mycobacterium tuberculosis complex

PCR

Detección DNA

Vítreo

M. tuberculosis complex identificación

Secuenciación 16S

Identificación de especie

Cultivo o amplicón

Sarampión virus

RT-PCR

Detección RNA

Corneal y conjuntival

Toxoplasma gondii

PCR

Detección DNA

Vítreo

Uveitis virica (HVS1-2, VZV, CMV, EBV)

PCR

Detección ac. Nucleicos

Vítreo

Varicela-zoster, virus (VZV)

PCR

Detección DNA

Cornea, humor acuso y vítreo

TAGS
laboratorio genética · laboratorio clínico central · laboratorio biopatología molecular
bioquímica · inmunología · anatomía patológica · hematología · microbiología · veterinaria
citogenética constitucional · citogenética onco-hematologica · citogenética prenatal
biopatología molecular infecciosa · biopatología molecular onco-hematologica · biopatología molecular de patologias hereditarias
nefrogenética · cardiogenética · metabólicas
· multisistémicas · neurogenética · diagnóstico prenatal · onco-hematología ·
test de intolerancia alimentaria · enfermadad celiaca · perfil hormonal reproductivo · infertilidad y reproducción · array-cgh
cribado del primer y segundo trimestre · pruebas de paternidad · oftalmología · novedades · otras patologías hereditarias